ساخت وکتور بیانی pcDNA3.1-FSHβ به منظور انتقال ژن زیر‌واحد FSHβ به سلول لاین پستان‌داران

  سابقه و هدف: هورمون محرک فولیکولی (Follicle stimulating hormone, FSH)، یکی از هورمون‌های گلیکوپروتئینی هیپوفیز است که از دو زیر‌واحد آلفا و بتا تشکیل شده است. زیرواحد بتا حاوی 111 اسیدآمینه و یک سیگنال پپتید 18 اسیدآمینه‌ای و مسئول فعالیت بیولوژیکی هورمون می‌باشد. هدف از این مطالعه ساخت وکتور بیانی pcDNA3.1-FSHβ به منظور انتقال ژن زیر‌واحد FSHβ به سلول لاین پستانداران بود. مواد و روش‌ها: ابتدا یک جفت پرایمر برای ساب‌کلونینگ زنجیره β از T.vector طراحی گردید تا علاوه بر داشتن نواحی ابتدا و انتهای ژن زنجیره β دارای محل اثر آنزیم‌های HindΙΙΙ و EcoRΙ باشد. زنجیره بتای آمپلیفیه شده از ناحیه جای‌گاه دو آنزیم فوق در پلاسمید pcDNA3.1 کلون و پلاسمید نوترکیب به وسیله ترانسفورماسیون وارد سلول E.coli گردید. کلون‌های تشکیل‌شده به وسیله PCR مجدد بررسی و پلاسمید تعدادی از کلون‌های مثبت تخلیص گردید. صحت پلاسمیدهای خالص شده به دو روش هضم آنزیمی و تعیین توالی تأیید گردید. یافته‌ها: آنالیز آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که پلاسمید pcDNA3.1-F390β دارای ساختار پلاسمیدی و توالی ژنی صحیح است و تطابق کامل با ژن بتای هورمون FSH گزارش شده در GenBank دارد.  نتیجه‌گیری: این پلاسمید نوترکیب به لحاظ ساختاری صحیح و جهت انتقال ژن به سلول کشت پستان‌داران و ارزیابی بیان مناسب می‌باشد.